• <ul id="ssauq"><acronym id="ssauq"></acronym></ul>
  • <strike id="ssauq"><menu id="ssauq"></menu></strike>
  • <noscript id="ssauq"><table id="ssauq"></table></noscript>
    • 當(dāng)前位置:
      首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)操作說明書
      目錄導(dǎo)航 Directory
      服務(wù)熱線
      技術(shù)支持Article
      細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)操作說明書
      點(diǎn)擊次數(shù):2164 更新時(shí)間:2022-06-13

        

       

      細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I)說明書

                                                                                                 

      RNApure Bacteria KitDNase I

      細(xì)菌RNA提取試劑盒(DNase I

       

      Cat. No.   K0539

      保存:DNase I10×Reaction Buffer-20

      其它組分:室  

       

      組分說明

       

                                                    Cat. No.              k0539

                                                    Kit Size                 50

                                                    DNase I                1000 U

                                              10×Reaction Buffer           1000  μl

                                                   Buffer RL               35 ml

                                                  Buffer RW1               40 ml

                                          Buffer RW2concentrate)          11 ml

                                              RNase-Free Water             10 ml

                                            Shredder Spin column             50

                                               Spin Column RM               50

                                          Collection Tube1.5 ml)            50

                                           Collection Tube2 ml)            100

       

      產(chǎn)品簡介

       

          本試劑盒采用高效、專一結(jié)合核酸的離心吸附柱和*的緩沖系統(tǒng),可從細(xì)菌或培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞中快速提取總 RNA30-40 分鐘內(nèi)即可完成反應(yīng),提取的總 RNA 純度*,沒有蛋白質(zhì)和其他污染,適用于 RT-PCRReal-Time RT-PCR、芯片分析、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

       

      注意事項(xiàng)

       

      1.  預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

      1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

       

      2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí),塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

      3)配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。

       

      4)操作人員戴一次性口罩和手套,實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。

      2.  Buffer  RL 在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇至終濃度為 1%,如 1 ml Buffer  RL 10 μl  β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的

       

      Buffer RL 4℃可保存 1 個(gè)月,如出現(xiàn)沉淀,請(qǐng)加熱溶解后使用。

      3.  第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在 Buffer RW2 中加入無水乙醇。

      5.  如未特殊說明,所有離心步驟均在室溫下進(jìn)行,且所有操作步驟動(dòng)作要迅速。

       

      自備試劑:LysozymeYJ0887)、β-巰基乙醇、無水乙醇(新開封或提取RNA專用)  

       

       

      操作步驟

       

       1.   4℃  10,000 rpm~13,400×g)離心2分鐘收集菌體(菌體量最大不超過1×109 ),小心去除所有上清。

                                                                                      

           注意:上清如果有殘留,會(huì)影響后續(xù)的消化過程。

       

       2.   用含有Lysozyme100  μl TE緩沖液*重懸菌體,室溫孵育。具體配方和孵育時(shí)間如下:

       

      TE 緩沖液中 Lysozyme 的終濃度                孵育時(shí)間

       

      G 細(xì)菌                  400  μg/ml                 3-5 分鐘

                                -

      G+ 細(xì)菌                 3 mg/ml                   5-10 分鐘

       3.   加入350  μl裂解液RL(使用前請(qǐng)檢查是否加入β-巰基乙醇),渦旋震蕩混勻(此步驟可能出現(xiàn)不溶性沉淀),將溶液與沉淀全部加入到已裝入收集管(Collection Tube 2 ml)的過濾柱(Shredder Spin Column)中,10,000 rpm離心 2分鐘。

       4.   向上步得到的濾液中加入250  μl無水乙醇,混勻(此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀)。將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱(Spin Column RM)中(吸附柱已裝入2 ml收集管中),10,000 rpm離心1分鐘,棄掉廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

       5.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW110,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

       6.   配制DNase I  混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8  μl 10×Reaction Buffer 20  μl DNase I1U/μl),混勻,  配制成終體積為80 μl的反應(yīng)液。

       7.   向吸附柱中直接加入80 µl DNase I  混合液,20-30℃孵育15分鐘。

       8.   向吸附柱中加入350  μl Buffer RW110,000 rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

       9.   向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇), 10,000 rpm離心1分鐘,棄廢液。

       10. 重復(fù)步驟9

       11. 將吸附柱放回收集管中,10,000 rpm離心2分鐘。

           注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR)

       12. 將吸附柱裝入新的RNase-Free1.5 ml  收集管中,向吸附膜的中間加入30-50 μl RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,10,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

      注意:1)  RNase-Free Water 體積不應(yīng)小于 30 μl,體積過小影響回收率。

      2)  如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟12

      3)  如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟12

      2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

       

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

       


      滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

      久久99精品国产自在现线小黄鸭| 国语自产偷拍精品视频偷| 四虎永久在线精品免费一区二区 | 久久99视频精品| 国产精品久久现线拍久青草| 精品一区二区三区无码免费视频| 国产伦精品一区二区三区视频金莲| 四虎必出精品亚洲高清| 亚洲AV无码国产精品麻豆天美| 精品乱人伦一区二区| 久久夜色精品国产噜噜亚洲a| 亚洲国产精品高清久久久| 人成精品视频三区二区一区| 国产亚洲精品VA片在线播放| 久久久亚洲精品视频| 久久免费国产精品| 国产精品亚洲精品日韩动图| 国产精品香蕉一区二区三区 | 日韩成人精品日本亚洲| 精品无码AV一区二区三区不卡| 日韩人妻无码精品系列| 人妖系列精品视频在线观看| 日韩精品一区二区三区毛片| 99视频全部免费精品全部四虎 | 国产精品一区二区久久精品涩爱| 四虎成人精品无码| 亚洲精品午夜国产VA久久成人| 亚洲综合国产精品第一页 | 免费精品国产日韩热久久| 杨幂国产精品福利在线观看| 亚洲精品无码久久久久| 精品国产爽爽AV| 亚洲电影日韩精品| 精品一区中文字幕| 国产成人高清精品免费鸭子 | 精品国产污污免费网站入口| 四库影院永久在线精品| 国产精品自在线拍国产手青青机版 | 97视频热人人精品免费| 精品国产一二三区在线影院| 91大神精品网站在线观看|