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      土壤脲酶 (S-UE) 活性檢測試劑盒說明書
      點擊次數:917 更新時間:2023-10-11

      壤脲酶 (S-UE) 活性檢測試劑盒說明書

      量法

      意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。

      格:100T/48S

      產品內容

      試劑一: 甲苯2mL×1  瓶,4℃保存;  (自備)

      劑二:粉劑×1  瓶,臨用前加入9mL  蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的試劑4℃保 

      三:液體19mL×1  瓶,4℃保存;

      劑四A  液:液體0.4mL×1  支,4℃保存;

      試劑四B  液:液體1.6mL×1  瓶,4℃保存;臨用前將A  液倒入B  液中混合,待用;用不完的試 4℃保存一周

      五:液體 2mL×1  瓶,4℃保存;

      標準品:液體 1mL×1 支,1mg/mL 氮標準液。

      品說明:

      S-UE水解尿素,產生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數量、有機物質含量、

      全氮和速效氮含量呈正相關。土壤脲酶活性反應了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍比色法測定脲酶 尿素產生的NH3-N

      自備的儀器和用品:

      可見分光光/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96  孔板、研缽、冰、甲苯 (不允許快遞) 和蒸餾水。

      作步驟:

      a.    培養


      定管

      對照管

      干土樣(g)

      0.05

      0.05

      劑一 (μL)

      20

      20

      混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置 15min

      劑二 (μL)

      90


      餾水 (μL)


      90

      劑三 (μL)

      190

      190

      混勻, 37℃水浴培養 24h  后, 10000g  常溫離心 10min ,取上清液。

      b.    培養結束的上清液稀釋10 (取0. 1mL  上清液,加入0.9mL  蒸餾水) 。若最終計算得到的 ΔA仍大于0.5繼續稀釋。

      c.     標準品的準備:吸取適量的標準溶液,稀釋至10 8 6 4 2 1 0.5 0μg/mL


      d.    測氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑)


      定管

      對照管

      準管

      釋后的上清液 (μL) /標準品

      80

      80

      80

      劑四 (μL)

      15

      15

      15

      劑五 (μL)

      15

      15

      15

      分混勻,室溫放置 20min

      餾水 (μL)

      90

      90

      90

      混勻,于 630nm 處,蒸餾水調零,讀吸光值 A ,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一 個對照管。準曲線的建立:根據標準管的濃度 (y) 和吸光度 ( x,減去濃度為 0 的空白管) ,做標 準曲線。

      酶活力計算

      據標準曲線,將ΔA帶入公式 (x ) 計算測定中樣品的濃度 (μg/mL) y值。 的定義:每天每g土樣中產生gNH3-N定義為一個酶活力單位。

      脲酶活力 (U/g  土樣) =y×10×V反總÷W÷T=60×y

      10:稀釋倍數;T :反應時間,1dV反總:反應體系總體積,0.3mLW:樣本質量,0.05g

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