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      CY3標記反應原理
      點擊次數:59 更新時間:2025-06-25

      CY3標記

      CY3標記反應原理:
      Reactive CY3專一的與伯胺反應(N-末端及賴氨酸殘基側鏈)形成穩定的酰胺鍵

      CY3標記.png

      操作過程:
      實驗前準備:

      1.   仔細閱讀使用說明書。

      2.   計算待使用Reactive CY3的量。

      3.   提前20 min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的Reactive CY3繼續放置冰箱中)。

      4.   溶解Reactive CY3:加入20 μL DMFReactive CY3瓶中,靜置10 min,待其充分溶解,此時CY3的濃度為10 mM。

       
      操作步驟:(本操作步驟按照1 mg的量進行標記)

      1.   1 mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL12,000× g離心10 min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5 mL。待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次。)

      2.   加入13.3 μL Reactive CY3 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使抗體的終濃度為2 mg/mL,并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育60 min

      3.   12,000 × g離心10 min

      4.   加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5 mL,并輕輕吹打混勻,12,000×g離心10 min。并重復操作一次。

      5.   0.2 mL Labeling BufferFiltration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中,6,000×g離心10 min。

      6.   收集離心管中的溶液,即為CY3標記的抗體。

       
      注意事項

      1.   本試劑盒也可標記其它含有氨基(NH2-)的抗原、HRP、多肽,具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定。

      2.   DMF要密封干燥保存,使用完立即用封口膜封緊。

      3.   操作步驟5中,可用Labeling Buffer作為回收標記抗體的緩沖液,也可使用其它任何緩沖液或保護劑。

      4.   本試劑盒未開封前的有效期為一年,請在有效期內使用。

      5.   本試劑盒提供的為10 kDaFiltration tube,標記抗原或多肽請注意分子量的大小。

      6.   在步驟2中,標記其它抗體時,我們應先控制抗體的終濃度為2 mg/mL,然后再根據抗體的量計算應加入Reactive CY3的體積。

      7.   要確定在偶聯中不引入游離氨基(Tris,氨及疊氮鈉均可與活化CY3反應,因此會降低蛋白與CY3的偶聯率)。

       

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      實驗技術服務:

       


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