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      加A試劑盒說明書
      點擊次數:2914 更新時間:2015-05-18

       

      加A試劑盒說明書

       

      A-Tailing Kit

      加A試劑盒

      目錄號:YJ0803

       

       

      保存條件:-20℃保存。

       

      組分說明

       

                          Cat. No.                       YJ0803

                          Size                             20次

                          A-Tailing Enzyme(5 U/μl)         25 μl

                          10×A-Tailing Buffer             120 μl

                          dATP,2 mM                        25 μl

       

       

      本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

                                                      

       

          產品簡介

       

            利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶,如Pfu等進行PCR擴增時,其PCR產物為不帶  A尾的平末端  DNA片段,如想將該片段克隆到     T載體上,需要先利用A-Tailing  Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能與T載體上3’末端的T堿基互補連接。

          本產品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一個A尾,使平末端的 DNA片段進行TA克隆

      成為可能。本試劑盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在30分鐘完成整個過程。與平

          末端DNA片段克隆相比,TA克隆具有較高的克隆效率,可大大提高實驗成功率。

       

          使用方法

       

          1.將平末端PCR產物進行純化,若 PCR無非特異擴增可用 DNA產物回收試劑盒進行純化,若 PCR產物有非特異性擴增可用膠回收純化試劑盒進行純化。

          2.將以上純化好的平末端DNA片段按以下反應體系加A尾:

       

                                 試劑                      10 μl體系

                                 平末端 DNA片段             X μl(<1 μg)

                                 dATP                       1 μl 

                                 10×A-Tailing Buffer        1 μl 

                                 A-Tailing Enzyme           1 μl 

                                 RNase-Free Water       補足至 10 μl 

       

          3.輕輕混勻后72℃孵育30 min。

       

             注意:加A尾的產物可以不需要再次純化,可直接用于連接反應。

       

      滬公網安備 31011802001676號

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