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      Rosetta(DE3)感受態細胞說明書
      點擊次數:10074 更新時間:2015-05-27

       

      Rosetta(DE3)感受態細胞說明書

       

      Rosetta(DE3) Competent Cell

      Rosetta(DE3)感受態細胞

      目錄號:YJ0811

       

      保存條件:-80℃保存。

       

      組分說明

       

                     Cat. No.                              YJ0811A

                     Size                                   10×100 μl

                     Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

                     Control DNA pUC19,0.1 ng/μl              10 μl

       

      產品簡介

       

        本產品是采用進口Rosetta菌株,經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA

      的熱擊轉化。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質粒BL21的衍生菌,補充大腸桿菌缺乏的

      6種稀有密碼子( AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA)對應的tRNA,提高外源

      基因,尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。使用  pUC19質粒檢測,轉化效率可

      達10 7

       

       

      本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

       

       

          注意事項

       

          1.感受態細胞一定要用干冰運輸。感受態細胞應在  -80℃下保存,不可多次凍融和放

             置時間過長,以免降低感受態細胞的轉化效率。

          2.轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

          3.包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。

       

          操作步驟

       

          1.取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。

             以下實驗以50 μl感受態細胞為例。

          2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量

             的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

          3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

          4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。

          5.根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,

             倒置培養,37℃培養12-16小時。

      注意:1)涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少,可通過離心(4,000 rpm,2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

       

             2)新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

             3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

       

       

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