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      SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書
      點擊次數:678 更新時間:2015-06-08

       

       

      SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒說明書

       

       

      SuperQuickRT cDNA Kit

      (For Real-time PCR)

      SuperQuickRT cDNA*鏈合成試劑盒

      (For Real-time PCR)

      目錄號:YJ2381

      保存條件:-20℃。

      規格說明

       

           Cat. No.                            YJ2381B      YJ2381

           Kit Size                                25         100

           SuperQuickRT Mix                      12.5 μl      50 μl

           5×RT Buffer(For Real-time PCR)        55 μl       220 μl

           Primer Mix                            27.5 μl     110 μl

           dNTP Mix (2.5 mM Each)                55 μl       220 μl

           RNase-Free Water                       1 ml        1 ml

       

       

              本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

       

       

      產品簡介

       

        本產品是為Real-time  RT-PCR研發的快速逆轉錄試劑,其包含從RNA模板逆轉錄

      成cDNA*鏈所需的全部試劑,優化的反應體系為快速逆轉錄酶提供更可靠的反應條

      件。SuperQuickRT逆轉酶逆轉錄效率高,可對少量RNA模板進行良好的逆轉錄反應,

      15分鐘即可完成熒光定量 PCR模板cDNA*鏈合成。另外,逆轉錄反應溫度可以提

      高到50 oC,可通讀GC含量高和二級結構復雜的RNA模板。

       

      產品特點

      1.快速:42 oC,15min可完成cDNA*鏈合成。

      2.反轉錄效率高:反轉錄效率高于90%。

      3.靈敏度高:pg級模板也可以得到高質量的cDNA。

      4.通讀復雜模板:GC含量高和二級結構復雜模板。

       

       

      注意事項

       

      1.在操作過程中應避免RNase污染,防止RNA降解或實驗中的交叉污染,建議操作人

         員帶口罩和一次性手套并經常更換手套,使用專門的儀器和耗材。

      2.逆轉錄體系配制在冰上進行操作,防止RNA發生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于

         -20 oC保存,并盡量避免反復凍融。

      3.Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成,也可根據實驗需要選用Oligo-dT

         Primer或Gene Specific Primer。

      4.反應體系可倍比放大,10 μl反應體系可zui大使用1μg總RNA。

      5.對于二級結構復雜的RNA模板,建議在操作步驟之前,將模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上,短暫離心后進行下一步操作。

      操作步驟

       

      1.將模板RNA在冰上解凍;將試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上,使用前將每種

         溶液渦旋振蕩混勻,并經短暫離心后使用。

      2.根據以下表格配制反應體系,渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

       

      試劑                10 μl反應體系           終濃度

       

      dNTP Mix (2.5 mM Each)               2 μl          500 μM Each

      Primer Mix                           1 μl

                               1)

      RNA Template                         X μl         10 pg~1 μg2)

      5×RT Buffer(for Real-time PCR)       2 μl              1×

      SuperQuickRT Mix                    0.5 μl

      RNase-Free Water                  up to 10 μl

       

         注意:1)根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer,建議10 μl 反應體系加入Oligo-dT Primer 25 pmol,或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。

       

         2)如果總RNA量大于1 μg,請按比例擴大反應體系。

      3.42℃孵育15分鐘。

         注意:對于二級結構復雜或GC含量高的模板,可以提高逆轉錄溫度至50℃,增強逆轉錄效率。

      4.85℃孵育5分鐘,使逆轉錄酶失活。

      5.短暫離心后置于冰上,再進行后續Real-time PCR檢測,如果需要長時間保存,請

         置于-20℃。

       

         注意:進行Real-time PCR反應時,逆轉錄產物的加量應不超過PCR反應總體積的1/10。

       

       

                                                 2  

       

       

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