• <ul id="ssauq"><acronym id="ssauq"></acronym></ul>
  • <strike id="ssauq"><menu id="ssauq"></menu></strike>
  • <noscript id="ssauq"><table id="ssauq"></table></noscript>
    • 當(dāng)前位置:
      首頁 > 資料下載 > 過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒說明書微量法
      目錄導(dǎo)航 Directory
      服務(wù)熱線
      資料下載Down

      過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒說明書微量法

      提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大小:
      圖片類型: 下載次數(shù): 11 次
      資料類型: PDF 瀏覽次數(shù): 877次
      相關(guān)產(chǎn)品:
      文件下載    
      詳細(xì)介紹

      過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒說明書

      微量法

      注意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

      規(guī) 格 :100T/96S

      產(chǎn)品內(nèi)容:

      提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

      試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

      試劑二:液體 125μL×1 瓶,4℃保存。

      產(chǎn)品說明:

      CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

      H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠分解 H2O2,使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降,根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 CAT 活性。

      需自備的儀器和用品:

      紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔(UV 板)、研缽、冰和蒸餾水

      操作步驟:

      一、粗酶液提取:

      1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

      收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      2、血清(漿)樣品:直接檢測。二、測定步驟:

      1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 240nm,蒸餾水調(diào)零。

      2、CAT 檢測工作液的配制:用時(shí)在試劑二中加入 25mL 試劑一,充分混勻,作為工作液。

      3、測定前將 CAT 檢測工作液在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

      4、準(zhǔn)備96孔UV 板一塊(非普通酶標(biāo)板,普通酶標(biāo)板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于 340nm務(wù)必使用UV 板)。

      5、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄 240nm

      下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計(jì)算ΔA=A1-A2。三、CAT 活性計(jì)算:

      a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

      1、血清(漿)CAT 活力的計(jì)算:

      單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/mL)= [ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=459×ΔA

      2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計(jì)算:

      (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

      單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T=459×ΔA÷Cpr

      (2)按樣本鮮重計(jì)算:

      單位的定義:每 g 組織每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=459×ΔA÷W

      (3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

      單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×500)÷T =0.917×ΔA

      V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:H2O2 摩爾消光系數(shù),4.36×104L/ mol /cm;d:比色皿光徑,

      1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W: 樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬;109:單位換算系數(shù), 1 mol=109nmol。

      b.用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

      1、血清(漿)CAT 活力的計(jì)算:

      單位的定義:每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=764.5×ΔA

      2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 CAT 活力計(jì)算:

      (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

      單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T =764.5×ΔA÷Cpr

      (2)按樣本鮮重計(jì)算:

      單位的定義:每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=764.5×ΔA÷W

      (3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

      單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。

      CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×500)÷T=1.529×ΔA

      V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:H2O2 摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol/ cm;d:96 孔板光徑,

      0.6cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W: 樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬;109:單位換算系數(shù), 1 mol=109nmol。



      注意事項(xiàng):

      出現(xiàn)負(fù)值怎么辦? 首先檢查吸光值是否超過 3,如果超過3很可能是沒有用UV 板,請(qǐng)換用 UV 板。如果未超過 3,仍然出現(xiàn)負(fù)值則檢查反應(yīng)過程是否產(chǎn)生氣泡,氣泡多說明酶活性太高,氣泡影響 產(chǎn)生了負(fù)值,可以將樣本用提取液稀釋 10 倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒有產(chǎn)生 氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值,說明該樣本測不到該酶活。


      從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):




      滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

      精品无码久久久久久久久久| 亚洲AV无码久久精品色欲| 久久er国产精品免费观看2| 精品伊人久久大线蕉色首页| 精品99又大又爽又硬少妇毛片| 国产成人精品视频网站| 少妇伦子伦精品无码STYLES| WWW国产精品内射老师| 国产精品密蕾丝视频| 国产叼嘿久久精品久久| 亚洲日韩精品无码专区加勒比☆| 国产69精品久久久久99| 久久久国产精品无码一区二区三区| 狠狠色伊人久久精品综合网| 精品久久国产视频| 亚洲国产精品日韩在线观看| 久久这里只有精品久久| 亚洲午夜精品第一区二区8050| fulidown国产精品合集| 国产成人精品手机在线观看| 精品第一国产综合精品蜜芽| 精品一区二区三区无码免费直播 | 国产成人综合久久精品下载| 99j久久精品久久久久久| 最新国产成人精品2024| 精品视频午夜一区二区| mm1313亚洲国产精品无码试看| 2021国产精品自拍| 久久国产视频精品| 国内精品手机在线观看视频| 国产内地精品毛片视频| 无码日韩精品一区二区人妻| 国产成人精品三级麻豆| 在线视频精品一区| 久久精品人人做人人爱爱| 精品一区二区三区四区在线播放 | 国产精品极品美女自在线观看| 精品久久无码中文字幕| 精品无人区一区二区三区| 亚洲高清国产AV拍精品青青草原| 国产精品女人呻吟在线观看|