豬偽狂犬 gE 抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

英文名稱(chēng)：ELISA Kit for detection of antibody against Pseudorabies virus gE glycoprotein

【規(guī)格】

96T×2/盒

【作用與用途】

測(cè)定豬血清中豬偽狂犬 gE 抗體，用于偽狂犬病毒gE 基因缺失疫苗免疫豬與自然感染豬的鑒別診斷

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀，雙波長(zhǎng) 450/630nm 濾光片

2．精q的微量移液器（單道 1-100μl、0.5-10μl、多道 30-300μl）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10μl，200μl）

7．去離子水

【主要組成成份】

【樣本要求】

1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過(guò)一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫 30min，可以獲得J結(jié)果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作 40 倍稀釋?zhuān)矗?/span>5μl 血清加 195μl 樣品稀釋液），混合均勻。

3．陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將陽(yáng)性對(duì)照血清和陰性對(duì)照血清作4倍稀釋?zhuān)矗?0μl血清加150μl樣本稀釋液），混合均勻。

4．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋 20 倍（即 1ml 濃縮洗滌液加 19ml 水），即可使用。注意：使用前要使結(jié)晶*溶解。

 【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測(cè)時(shí)，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各 2 孔，分別加入稀釋后的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清 100μl 于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加 100μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）。

 2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置 37℃溫育 30 分鐘。

 3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿(mǎn)反

應(yīng)板孔，靜置 10 秒甩出，洗滌 3 次，后

一次洗滌后在吸水紙上拍干。

 4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物 100μl。

 5．溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板

膜，置 37℃溫育 30 分鐘。

 6．洗板：同步驟 3。

 7．顯色：每孔加顯色劑 100μl，振蕩混勻，

37℃避光反應(yīng) 10 分鐘。

 8．終止：每孔加終止液 50μl，振蕩 10 秒，

充分混勻，終止后即讀數(shù)。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀取各孔吸光度值（OD 值）。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的 OD 值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均 OD 值≥0.5，陰性對(duì)照孔的平均 OD 值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由 S/P 值決定，S/P 值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

S/P=(樣本 OD450/630 值-NCx)/（PCx-NCx)，

其中 NCx表示陰性對(duì)照孔平均 OD450/630 值

（0.05 以下的數(shù)值按 0.05 計(jì)算）；PCx表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均 OD450/630 值；

當(dāng)樣本的 S/P≥0. 25時(shí)判為陽(yáng)性；樣品 S/P 值＜0.25時(shí)判為陰性；

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅供研究使用。

 2．不要使用過(guò)期的試劑盒組分，不要把不同

批次的組分混合使用。

 3．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

 4．使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫

（20～25℃），并搖動(dòng)使沉淀溶解（hao在

37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用去離

子水作 20倍稀釋?zhuān)ɡ纾?0ml的濃縮洗滌液

加上 950ml 蒸餾水），混勻，稀釋好的洗滌

液在 2～8℃可以存放 7-10 日。

 5．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鐘，或5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。

 6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平

衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封 2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于 2℃-8℃避光保存。

 7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常

校對(duì)其準(zhǔn)確性。

 8．加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿(mǎn)而不溢，防止孔口有

游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

 9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)

立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有期

12 個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。

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